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              食品安全国家标准-食品微生物学检验-阪崎肠杆菌检验

              GB 4789.40-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 阪崎肠杆菌检验

              录入时间:2010-4-28 9:02:54 来源:国家卫生部

              前 言
              本标准代替 GB/T 4789.40-2008 《食品卫生微生物学检验 阪崎肠杆菌检验》 。
              本标准与GB/T 4789.40-2008相比,主要变化如下:
              ——修改了标准的中英文名称;
              ——删除了附录A中A.3。
              本标准的附录A、附录B为规范性附录。
              本标准所代替的历次版本发布情况为:
              ——GB/T 4789.40-2008。

              1 范围
              本标准规定了食品中阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)的检验方法。
              本标准适用于婴幼儿配方食品、乳和乳制品及其原料中阪崎肠杆菌的检验。

              2 设备和材料
              除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:
              2.1 恒温培养箱:25 ℃±1 ℃,36 ℃±1 ℃,44 ℃±0.5 ℃。
              2.2 冰箱:2 ℃~5 ℃。
              2.3 恒温水浴箱:44 ℃±0.5 ℃。
              2.4 天平:感量 0.1 g。
              2.5 均质器。
              2.6 振荡器。
              2.7 无菌吸管:1 mL(具 0.01 mL 刻度)、10 mL(具 0.1 mL 刻度)或微量移液器及吸头。
              2.8 无菌锥形瓶:容量 100 mL、200 mL、2000 mL。
              2.9 无菌培养皿:直径 90 mm。
              2.10 pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸。
              2.11 全自动微生物生化鉴定系统。

              3 培养基和试剂
              3.1 缓冲蛋白胨水(buffer peptone water,BPW):见附录 A 中 A.1。
              3.2 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素(modified lauryl sulfate tryptose broth-vancomycin
              medium,mLST-Vm):见附录 A 中 A.2。
              3.3 阪崎肠杆菌显色培养基。
              3.4 胰蛋白胨大豆琼脂(trypticase soy agar,TSA):见附录 A 中 A.3。
              3.5 生化鉴定试剂盒。
              3.6 氧化酶试剂:见附录 A 中 A.4。
              3.7 L-赖氨酸脱羧酶培养基:见附录 A 中 A.5。
              3.8 L-鸟氨酸脱羧酶培养基:见附录 A 中 A.6。
              3.9 L-精氨酸双水解酶培养基:见附录 A 中 A.7。
              3.10 糖类发酵培养基:见附录 A 中 A.8。
              3.11 西蒙氏柠檬酸盐培养基:见附录 A 中 A.9。

              第一法 阪崎肠杆菌的检验

              4 检验程序

              阪崎肠杆菌检验程序见图 1。

              阪崎肠杆菌检验程序

              5 操作步骤
              5.1 前增菌和增菌
              取检样 100 g(mL)加入已预热至 44 ℃装有 900 mL 缓冲蛋白胨水的锥形瓶中,用手缓缓地摇动至充分溶解,36℃±1℃培养 18 h±2 h。移取 1 mL 转种于 10 mL mLST-Vm 肉汤,44℃±0.5℃培养24 h±2 h。
              5.2 分离
              5.2.1 轻轻混匀 mLST-Vm 肉汤培养物,各取增菌培养物 1 环,分别划线接种于两个阪崎肠杆菌显色培养基平板,36 ℃±1 ℃培养 24 h±2 h。
              5.2.2 挑取 1 个~5 个可疑菌落,划线接种于 TSA 平板。25 ℃±1 ℃培养 48 h±4 h。
              5.3 鉴定
              自 TSA 平板上直接挑取黄色可疑菌落,进行生化鉴定。阪崎肠杆菌的主要生化特征见表 1。可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统。

              阪崎肠杆菌的主要生化特征

              表 1 阪崎肠杆菌的主要生化特征

              6 结果与报告

              综合菌落形态和生化特征,报告每 100 g(mL)样品中检出或未检出阪崎肠杆菌。

              第二法 阪崎肠杆菌的计数

              7 操作步骤
              7.1 样品的稀释
              7.1.1 固体和半固体样品:无菌称取样品 100 g、 1 0 g、1 g 各三份,加入已预热至 44 ℃分别盛有 900 mL、90 mL、9 mL BPW 中,轻轻振摇使充分溶解,制成 1:10 样品匀液,置 36 ℃±1 ℃培养 18 h±2 h。分别移取 1 mL 转种于 10 mL mLST-Vm 肉汤,44 ℃±0.5 ℃培养 24 h±2 h。
              7.1.2 液体样品:以无菌吸管分别取样品 100 mL、10 mL、1 mL 各三份,加入已预热至 44 ℃分别盛有 900 mL、90 mL、9 mL BPW 中,轻轻振摇使充分混匀,制成 1:10 样品匀液,置 36 ℃±1 ℃培养 18h±2h。分别移取 1 mL 转种于 10 mL mLST-Vm 肉汤,44 ℃±0.5 ℃培养 24 h±2 h。
              7.2 分离、鉴定
              同 5.2,5.3。

              8 结果与报告
              综合菌落形态、生化特征,根据证实为阪崎肠杆菌的阳性管数,查 MPN 检索表,报告每 100 g(mL)样品中阪崎肠杆菌的 MPN 值(见附录B中表 B.1)。

               

              食品微生物学检验2010标准
              食品微生物学检验2010标准(GB 4789)已于2010年3月正式颁布并于2010-06-01开始实施.
              详细请看:
              GB 4789-2010检验标准
              GB 4789-2010培养基目录
              食品微生物学检验2010标准
              GB 4789.1-2010 总则
              GB 4789.2-2010 菌落总数测定
              GB 4789.3-2010 大肠菌群计数
              GB 4789.4-2010 沙门氏菌检验
              GB 4789.10-2010 金黄色葡萄球菌检验
              GB 4789.15-2010 霉菌和酵母计数
              GB 4789.18-2010 乳与乳制品检验
              GB 4789.30-2010 单核细胞增生李斯特氏菌检验
              GB 4789.35-2010 乳酸菌检验
              GB 4789.40-2010 阪崎肠杆菌检验
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